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早期大蛇丸对晓组织有兴趣，会面佩恩。佩恩直接一发神罗天征将大蛇丸弹飞。被击败后因为觉得晓组织和历史级别的强大忍村木叶等相比还不够强，选择加入晓组织。在晓组织取得一定的研究成果后脱离，独自招兵买马创立音忍村，手下有药师兜、君麻吕等巨头。在中忍考试死亡森林面对超新星宇智波佐助，发挥出色。佐助一开始有点拉跨，后面爆发写轮眼与大蛇丸大战，结果还是被击败。在三忍会战篇，面对逐渐成长的漩涡鸣人。虽然鸣人一直都被人称作“吊车尾”，“最水下忍”等，忍术用起来很粗糙，但他仍用一发螺旋丸成功废掉拥有阴愈伤灭的巨头药师兜，使其难以作战，大蛇丸因此折了左膀右臂。面对“恐血”纲手、被下药的自来也两个伪巨头的配合，大蛇丸以一敌二被击败后遁走，大蛇丸算火影忍者第一部第一人吗？